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火锅底料及小吃类食品中非法添加罂粟壳的危害及检测技术研究进展

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福建分析测试Fujian Analysis&Testing 9 火锅底料及小吃类食品中非法添加罂粟壳的危害及检测技术 研究进展 张林田,史佳虹,杨(汕头出入境检验检疫局,广东唏,孙烽伟 汕头51 5041) 摘要:简要综述了火锅底料及小吃类食品中非法添加罂粟壳的危害、相关的监管措施及检测原理,并介绍了食品 中非法添加罂粟壳的化学检测法、薄层法、示波极谱法、酶联免疫法、气相色谱法、气质联用法、液相色谱法、液相色 谱串联质谱法等分析方法,同时对这些方法进行评述。 关键词:火锅底料;小吃类食品;罂粟壳;检测技术 中图分类号:0657.+TS201.6文献标识码:A文章编号:1009—8143(2014)03—0009—05 Doi:10.3969 ̄.issn.1009—8143.2014.03.03 The harm of pericarpium papaveris as illegally added in hot pot seasonings and snack foods and the research progress of detection technology Zhang Lin-tian,Shi Jia-hong,Yang xi,Sun Feng—wei (Impo ̄一Export Inspection and Quarantine Bureau of Shantou,Shantou,Guangdong 515041,China) Abstract:Described briefly the harm due to illegal addition of pericarpium papavefis in hot pot seasonings and snack foods, relevant regulatory measures and detection principle.Introduced the chemical detection method,thin layer method, oscilloscopic polarography,ELISA,GC,GC—MS,LC,LC—MS/MS and SO on as illegal addition of pericarpium papaveris in foods.Meanwhile,give a review of these methods Keywords:hot pot seasonings;snack foods;pericarpium papaveris;detection technology 罂粟壳,俗称大烟,是罂粟割取药浆汁后的果 实壳,和鸦片相比,其有毒物质含量不大、纯度不 高,但同样包括吗啡等3O多种生物碱。不法商贩利 用罂粟壳中残留的生物碱能使人体产生快感,并逐 渐产生依赖性进而成瘾这一特点,为招揽回头食 客,而在其中添加罂粟壳。本文从添加罂粟壳的食 罂粟壳中的生物碱虽然含量较少,对吸毒者不 起作用,但对于绝大多数从未接触过毒品并对毒品 有高度敏感性的人来说,其“效用”不可低估;如果 长期食用含有毒品的食物,会出现兴奋、烦躁不安、 出虚汗、乏力、面黄肌瘦、犯困等中毒症状;会使人 嗜睡和性格改变,引起某种程度的惬意和欣快感,可 造成人思维和记忆性能的衰退,长期食用会引起精 品对人造成的危害及相关监管法规、测定原理、主 要分析方法介绍、方法的技术指标比较及检测技术 展望等方面进行综述。 神失常,出现幻觉,严重时甚至会导致呼吸停止而死 亡;有些司机食用这种食物后出现兴奋、犯困、烦躁 等症状,出现注意力不集中而发生交通事故;添加 1危害及相关监管法规 了罂粟壳的食物易使消费者成瘾,甚而走上吸毒之 收稿日期:2014—1—21 作者简介:张林田(1973一),男,高级工程师,从事色谱分析工作。Email:stciqzh@163.eom 10 福建分析测试综述与进展 路。 1991年8月,卫生部、公安部、国家工商行政管 理局就针对四川、河南等地食品卫生经营户在火锅 佐料等食品中使用罂粟壳的问题,联发了《关于查 处在食品中使用罂粟壳(籽)等违法行为的通知》, 并组织各地依法进行了查处。O8年l2月罂粟壳被 卫生部列为第一批食品中可能违法添加的非食用 物质名单,禁止添加于火锅食品中。2011年3月份 卫生部公布的第五批可能违法添加的非食用物质 名录中,又将罂粟壳的禁用的产品类别范围扩大为 “火锅底料及小吃类食品”,并列出主要成分为“罂 粟碱、那可汀、可待因、吗啡”。罂粟壳列入国务院 颂布的《麻醉药品管理办法》名录中,按麻醉药品进 行管理。 2 测定原理 不法食品加工业者并不是将罂粟壳直接加入 火锅底料中,而是将罂粟壳、籽磨成粉末或制成水 浸物混入火锅汤料、卤制品等食品中,而罂粟壳含 有以吗啡、可待因、那可汀、罂粟碱等为主要成分的 20多种生物碱,因此测定食品中吗啡等生物碱的含 量从而判断其中是否添加罂粟壳是较可行的方 法。但不同产地的罂粟壳中各种生物碱的含量不 同,应尽可能对含量相对较多的吗啡、可待因、那可 汀、罂粟碱等进行多组分检测,才能较为科学地判 断食品中是否添加罂粟壳。 在进行检测时,通常是利用生物碱在碱性条件 下溶于有机溶剂、酸性介质的条件下溶于水的特 点,而采用酸性溶液提取被测组分、再对提取液进 行脱脂净化、然后将提取液pH调至9以上后用有机 溶剂反萃取,最后采用适当方法进行含量检测或定 性检测。 3相关检测方法 国内目前并无统一的国家标准检测方法,给食 品的监督管理工作带来了一定技术难题,各检测实 验室参照各自非标准方法进行样品检测,造成方法 的特异性、重复性、检出限不一致,最终导致检出率 的差异。目前文献报道的食品中罂粟壳生物碱成 分的测定方法主要有化学分析法、薄层色谱法、免 疫分析法、气相色谱及气质联用法、液相色谱法及 液质联用法等。 3.1化学分析法 化学分析法是根据罂粟壳所含生物碱与特定 试剂反应显色来定性。冯丽娟u 在其硕士研究论文 中引用王明常等报道的卤制品中掺人罂粟壳的定 性分析方法,样品经提取后,滴于白色瓷板上,挥干 溶剂,分别滴加钼酸铵、钒酸铵、硫酸铵和甲醛硫酸 观察反应。该方法简便、快速,适用于现场快速检 测,是一种常量分析方法,其检测灵敏度不适应当 前人们对食品安全的要求,同时测定结果有一定的 主观性且易受食品中的有色基质干扰。 3.2纸色谱法与薄层色谱法 马明善口 用1%盐酸提取食品中的罂粟碱,石油 醚脱脂后将提取液pH调至9,用氯仿反萃取后浓缩 后纸色谱法测定,以2%枸橼酸钠一丁醇(10:0.5)为 展开剂,在254nm荧光灯下观察,罂粟碱呈绿色灾 斑,Rf=0.71,该方法罂粟碱检测限为0.05 ̄g,在食品 中检出罂粟壳浓度为0.05mg/g,在食品佐料汤中可 检出0.5 mg/g。孙立波 等用酸性乙醇(pH4)在85 ̄C 水浴回流方式提取烧烤食品中的生物碱,挥干后用 100ml/L冰乙酸溶液溶解,石油醚脱脂,氨水调pH 至9.0,氯仿+异丙醇(3+1)反萃取,蒸干后残渣用5ml 水和lml氨水搅拌溶解,加人2g中性氧化铝及2g活 性炭,搅拌吸附后转人层析柱中,用100ml氯仿+异 丙醇(3+1)洗脱,蒸干,残渣用甲醇+三氯甲烷(9+1) 溶解后用薄层扫描仪测定,在硅胶GF254板上点 样,以醋酸乙酯一甲醇一氨水(85:10:2)为展开剂,扫 描波长240 nm,以Rf定性,峰高外标两点法定量,结 果是五种组分的线性相关系数均/>0.99,回收率在 55%一90%之间,检出限不大于0.5lxg。 该法分离效果好,可同时测定多种生物碱,但 该法灵敏度低、特异性较差,样品提取过程复杂,所 需有机溶剂品种多且用量大,易污染环境、对工作人 员有较大危害。 张林田等:火锅底料及小吃类食品中非法添加罂粟壳的危害及检测技术研究进展 1 1 3.3示波极谱法 极谱法是根据罂粟壳中的吗啡亚硝基化后在 碱性条件下产生吸附催化波的原理。陶锐等 建立 火锅汤料中吗啡的示波极谱分析法,样品用3mol/L 盐酸调pH至1~2,用氯仿脱脂净化后的液体用氯 仿与异戊醇(9+1)提取3次,水层用氨水调pH至9— 9.5,再用氯仿与异丙醇(9+1)提取2次,合并氯仿提 取液后用氨水一氯化氨溶液提取,后氯仿脱水于蒸 发皿,水浴挥干氯仿,0.1rnol/L盐酸溶解;示波极谱 分析测定其含量,在EP=一0.64v(VESCE)处产生一 个理想,高灵敏度的极谱波,方法最低检测浓度为 0.025 txg/mL,回收率为85.15%一92.10%,RSD为 4.03%~18.5%。该方法只能测定吗啡一种,前处理 繁琐,检测效率低,所用的有机溶剂品种多且用量 大,环境温度条件及样品基质对检测结果的影响 大,各种香料及蔬菜等在EP=一0.64v时存明显的测 定干扰峰,动物胶、聚乙烯醇能使峰电位剧减甚至 消失。 3.4酶联免疫分析法 利用未知抗原和酶标抗原竞争结合包被在小 孔中的特异性抗体这一原理。张冬升等 采用温水 浸泡后煮沸20min提取固体样品中的罂粟碱,再用 正已烷脱脂后的液体作为待测液,用酶联免疫法测 定,标准品在0.5~1O.0 g/L时有良好的线性关系, r=一0.9931,最低检出浓度可达1.0 ̄g/kg,加标回收率 在73%~95%之间,10次测定的相对标准偏差小于 4%。钮伟民等 过制备获得特异性抗罂粟碱(Pap) 免疫球蛋白(抗体)和罂粟碱一辣根过氧化物酶 (Pap—HRP)结合物(酶标抗原),研制了ELISA检测 罂粟碱的检测试剂盒,该方法检测限为0.1 g/kg,检 测范围O.11 ̄g/kg~201.zg/kg,样品回收率>80%。酶联 免疫分析法有快速、高通量、高灵敏和高特异性等 众多优点,又因该抗体与其他阿片类生物碱有一定 交叉反应的特点,将其作为是否添加罂粟壳的筛选 有实际意义,易于基层单位开展批量检查,但该方法 只能初筛检测,不能准确定量,抗体保存时间较短, 重复性差,假阳性率高等缺点。 3.5气相色谱法与气相色谱质谱法 李永芳等 先将样品用盐酸调pH至1^,2,电炉 上浓缩后定容,用氨水调pH至9~10后用氯仿一甲 醇(3+1)提取,取溶剂层用气相色谱一FID检测,用内 装涂有5%SE一30的Shimalite W—AWDMCS担体的 玻璃柱(3.2mmX2.1m)进行分离,该方法罂粟壳的检 测量为2mg/kg。 张艳萍等[81用2%乙酸溶液、振摇方式提取样品 中的罂粟碱和吗啡,乙醚去脂后的提取液用氨水调 pH至9,再用三氯甲烷和异丙醇(4+1)混合液萃取, 氮气吹干,GC—MS法测定,EI源电离,电离能量 70ev,吗啡选择162.0、215.0、285.0,罂粟碱选择 154.0、324.0、338.0进行扫描,外标法标准曲线比较 定量,结果是罂粟碱和吗啡在1.0—30.Omg/L、2.0— 80.0 mg/L浓度范围内具有良好的线性,检出限分别 为0.01和0.05mg/kg。GC—MS法比GC—FID法灵敏 度高,且符合对禁用物质的定性要求,但其只测定 吗啡和罂粟碱。 3.6高效液相色谱法(HPLC法) 冯丽娟等 1建立超声一微波协同萃取一HPLC检 测掺罂粟壳肉汤中的生物碱,采用75%乙醇作提取 液、酒石酸调pH至4、超声一微波协同萃取样品中 的被测组分,萃取液经脱脂棉过滤后水浴挥去乙 醇,石油醚脱脂,氨水调pH至9.0左右,用三氯甲 烷一异丙醇(3:1)萃取,无水硫酸钠脱水后水浴挥 干有机溶剂,甲醇定容至5 mL。HPLC一紫外检测 法进行含量分析,以5 mMol/L磷酸二氢钠(含0.05 mMol/L磷酸氢二钠)及乙腈为流动相,Eclipse XDB C18柱分离,流速1 mL/min,柱温30cc,检测波长分 别为210 nm、213 lqm及253 Elm,该方法检测限大于 0.08 mg/L,回收率大于90%,RSD小于0.7%。陈建 军 用甲醇超声提取样品中的吗啡和可待因,Chem Elut固相萃取小柱纯化提取液,HPLC—uv法测定, 以甲醇及pH 7.0乙酸铵(40:60)为流动相,在Shim— pack CLC—ODS柱上进行洗脱分离,流速1.0 ml/min, 检测波长为212 nm,吗啡浓度在0~50 mg/L,可待 因在0—80 mg/L范围内具有良好的线性,检测下限 分别为0.1 mg/L和0.5 mg/L,方法回收率分别为 94.7%和92.3%,RSD分别为3.87%和4.58%。皮立 12 福建分析测试综述与进展 等n 1建立罂粟籽和火锅汤料中罂粟碱的高效液相色 谱荧光检测法,采用甲醇超声提取样品中的罂粟 碱,高效液相色谱一荧光检测法进行含量分析,以 Phenomenex RP—C 1 8柱分离,甲醇与0.02mol/L乙酸 铵(70:30)为流动相,流速0.8mL/m in,荧光检测器 激发波长为285nm,发射波长为355nm,结果是罂粟 碱在0.Ol~10.0mg/L具有良好线性,线性方程Y= 927476+14838.54X,r=0.9997,最低检测限0.02ng,罂 粟籽中罂粟碱的回收率为99.O%~100.8%。 HPLC法分生物碱可采用DAD或FLD检测器, 后者灵敏度比前者高2个数量级,双波长定性相对 可靠,HPLC法对于基质成分复杂的样品来说,在生 物碱成分含量较低的情况下,容易受干扰物质的影 响。 3-7液相色谱一串联质谱法 张虹 等建立了液相色谱一电喷雾串联四极杆 质谱法定量检测掺罂粟壳食物中四种生物碱的残 留的检测方法,采用0.1mol/L HC1溶液超声提取样 品中的生物碱,正已烷脱脂后的提取液经MCX柱净 化,5%氨水甲醇洗脱液氮气吹干后定容至1 mL。 用WatersAtilantis,C18柱分离,以甲醇和10 retool/ L乙酸铵为流动相进行梯度洗脱,该方法的最低 检测限分别为0.24、0.08、0.01、0.003 g/L,回收率 在95%~110%。王力清等 1采用乙腈一0.1mol/L 盐酸溶液(1+1)超声提取调料中的被测组分,提 取液用正已烷净化后再用MCX固相萃取柱净 化,UPLC—MS/MS进行检测,以0.1%的乙酸一乙腈 溶液+10 mmol/L乙酸铵溶液(pH 4.5)为流动相进行 梯度洗脱,Agilent Eclipse plus C18柱分离,流速为 0.2 mL/min,柱温40 ̄C,该方法对调料中罂粟碱、那 可丁最低检出限分别为0.glxg/kg、1.01xg/kg,吗啡、可 待因和蒂巴因的最低检出限为50 ̄g/kg。刘敏敏等 采用水提取、乙腈萃取火锅底料中的生物碱成分, 用PSA及无水硫酸镁净化后的液体用20mmol/L乙 酸铵稀释后作为上机液,用HPLC—MS/MS检测,采 用CAPCELL PAK CR色谱柱进行分离,以乙酸铵 (含0.5%甲酸)一乙腈(50:50)及乙腈为流动相A、B 相进行梯度洗脱,该方法5种成分在1mg/L~40 mg/L 范围内线性良好,相关系数均达0.999,吗啡的检测 限为371xg/kg,其它四种检测限为llxg/kg,加标回收 率59.0%~102.8%,6次测定的RSD小于4.2%。王 柯u 等采用QuECHERS提取管提取罂粟壳中的生 物碱成分,ACQUITY UPLC BEH HILIC,以含0.1% 甲酸的乙腈及100 mmol/L甲酸铵水溶液+乙腈(1+ 1)(pH 3.0)为流动相,进行梯度洗脱,液相色谱一串 联质谱进行测定含量,五种生物碱成分在1 ng/ml~ 20 ng/ml范围内线性关系良好, >O.999,回收率在 70%~100%之间,罂粟碱、那可丁的检测限均为 5 ̄g/kg,其余为lot ̄g。 由于火锅、麻辣烫等食品中香料物质众多,给 微量生物碱检出造成严重干扰,因此预处理方法简 便、检测灵敏、定性准确、定量可靠的液质联用检测 技术在此方面发展迅速。 4 小结 火锅底料及小吃类食品中非法添加罂粟壳已 引起了人们对食品安全问题的广泛关注,制定相关 法规和检测标准尤为重要。对于复杂的食品样品, 其高效灵敏的检测越来越依赖于样品前处理,传统 的溶剂萃取法选择性差且回收率低,难以满足痕量 分析的要求;固相萃取可实现与色谱、质谱仪器在 线联用,能进一步提高分析的灵敏度。在分离检测 方法中,HPLC—MS 或GC—MS具有特异性强、可准 确定性,能精确定量、灵敏度高的优点,但此类仪器 设备昂贵、环境要求极高、检测周期较长,不适用于 基层和现场检测。酶联免疫分析法等快速筛查方 法可作为实验室或现场大量样品的快速筛查,但结 果受环境、温度、样品前处理技术等因素影响大,容 易出现“假阳性”,因此,检测“罂粟壳”食品通行做 法是“先筛选后确证”,以确证法的结果作为监管执 法的依据,这样既节约了成本,又不会误判。 参考文献: 【1】冯丽娟.食品中罂粟壳成分检测方法研究【D】.中国优秀硕 士学位论文全文数据库.2009.10. 2014,23(3) 张林田等:火锅底料及小吃类食品中非法添加罂粟壳的危害及检测技术研究进展 13 [2】马明善,李岩等.掺伪食品中罂粟壳的纸色谱测定法[J】.中 国卫生检验杂志,1992,2(3):375. 肉汤中的生物碱[J1.河北大学学报,2009,3(29),291—294 【10】陈建军.固相萃取一反相高效液相色谱法测定火锅中吗 啡和可待因『J】.实用预防医学,2006,3(13),766~767. 【1 1】皮立,胡凤祖等.高效液相色谱一荧光检测法测定罂粟籽 和火锅汤料中的罂粟碱『J1.色谱,200,6(23),639—641. 【3]孙立波,李静等.薄层扫描法测定烧烤食品中阿片生物碱 含量 中国公共卫生,1998,14(11):668—669. 【4】陶锐,高舸等等.火锅汤料中吗啡的示波极谱测定[J1_中国 卫生检验杂志,1994,3(4):140—143. 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