第３９卷第３期第３３１页 ２０１０年６月 华中科技大学学报（医学版） Ａｃｔａ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｈｕａｚｈｏｎｇ ＶｏＩ．３９ Ｎｏ．３ Ｐ．３３１ Ｊｕｎｅ． ２０１０ 缺氧诱导因子一１ 在肺癌组织中的表达及其与 肺癌淋巴道转移关系的研究 ＊ 周思静 ， 金常娥 ， 刘 建 ， 盛文超 华中科技大学同济医学院附属同济医院 综合科。呼吸内科，武汉４３００３０ 摘要：目的 研究缺氧诱导因子一Ｉ（ＫＨＩＦ一１ａ）与肺癌淋巴道转移的关系及其可能的作用机制。方法 采用免疫组织 化学方法检测７２例肺癌组织、癌周组织和２Ｏ例正常肺组织中ＨＩＦ－１ 、血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦ－Ｃ）及转化生长因 子一ａ（ＴＧ卜 ）的表达，采用Ｄ２—４０免疫组织化学法标记组织标本中的淋巴管并测定微淋巴管密度（Ｉ ＭＶＤ），对各因子表 达水平的相关性及癌周组织中Ｉ．ＭＶＤ与临床病理特征的关系进行统计学分析。结果 Ｉ）２—４０免疫组化染色显示，微淋 巴管主要集中在癌周组织，癌周组织Ｉ ＭＶＤ的高低与肺癌淋巴结转移具有正相关性。ＨＩＦ—ｌａ、ＶＥＧＦ—ｃ和ＴＧＦ—ａ在肺 癌组织中的表达水平明显高于正常肺组织（均Ｐ＜Ｏ．０５）；ＨＩＦ一１ａ的表达水平与ＶＥＧＦ—Ｃ、ＴＧＦ ａ表达水平及癌周组织 Ｉ ＭＶＤ呈正相关（ｒ值分别为０．４５２、０．３９６及０．４４４，均Ｐ＜０．０５），ＶＥＧＦ Ｃ的表达与ＴＧＦ－ｄ表达水平及癌周组织ＬＭ— ＶＤ呈正相关（ｒ值分别为０．３５７及０．５２３，均Ｐ％０．０５）。结论ＨＩＦ １ａ在肺癌组织中的表达与肺癌淋巴结转移显著相 关。ＨＩＦ－ｌａ可能通过上调肺癌组织中ＴＧＦ－￣和ＶＥＧＦ Ｃ的表达，从而参与肺癌的淋巴道转移过程。 关键词：肺癌； 微淋巴管密度； 缺氧诱导因子１ａ； 血管内皮生长因子Ｃ； 转化生长因子一ａ 中图分类号：Ｒ７３４．２ ＤＯＩ：１０．３８７０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—０７４１．２０１０．０３．０ｌ０ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｐｏｘｉａ Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｆａｃｔｏｒ－１ ａｌｐｈａ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｚｈｏｕ Ｓｉｊｉｎｇ ，Ｊｉｎ Ｃｈａｎｇ’ｅ ，Ｌｉｕ Ｊｉａｎ △ｅｔ ａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，。Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＴｏｎｇＪｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， ＴｏｎｇＪｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏ／ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００３０，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ一１ （ＨＩＦ ｌａ）ａｎｄ ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １ｅｖｅｌｓ ｏｆ ＨＩＦ－１“，ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ａ （ＴＧＦ—ｄ）ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－Ｃ（ＶＥＧＦ—Ｃ）ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａＩ ＳＡＢＣ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ７２ ｃａｓｅｓ ｏｆ １ｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ，７２ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ２０ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ１ｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｖｅｓｓｅｌ ｗａｓ ａｓ— ｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗｉｔｈ ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｄ２—４Ｏ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ（ＬＭＶＤ）ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｅｖｅ１ ｏｆ ＬＭＶＤ ｗａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＨＩＦ ｌ“， ＴＧＦ ａｎｄ ＶＥＧＦｕＣ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｔｈｅ ＨＩＦ一１Ｑ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＶＥＧＦ－Ｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＴＧＦ ｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ＬＭＶＤ（ｒ一０．４５２，０．３９６ ａｎｄ ０．４４４，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ｐ＜： Ｏ．Ｏ５）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ ＶＥＧＦ Ｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＧＦ—ｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ＬＭＶＤ（ｒ一０．３５７ ａｎｄ ０．５２３，Ｐ＜ Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＨＩＦ １ ａ ｍａｙｂｅ ｐｌａｙ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ— Ｃ ａｎｄ ＴＧＦ ｄ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ；ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—ａ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ；ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ一１ ｄ； ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ Ｃ； 目前，肺癌的发病率和病死率已经排在各类恶 性肿瘤的第一位１］］。侵袭性和转移性是恶性肿瘤的 重要标志之一。在肺癌的侵袭转移过程中，经淋巴 道转移这一途径扮演了非常重要的角色。但是肺癌 经淋巴道转移的具体机制目前并未完全明了。 缺氧诱导因子一ｌａ（ＨＩＦ—ｌａ）是一个作用广泛的 武汉市科技攻关协调计划项目（Ｎｏ．２００７６１０２３４２８） 周思静，女，１９８４年生，硕士研究生 通讯作者，Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｕｊｉａｎ＠ｔｊｈ．ｔｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 转录因子，它可以直接或者间接地超过２ 的 人类基因Ｌ２ｊ。ＨＩＦ—ｌａ下游有１００多个靶基因， ＨＩＦ一１ ｏ：与靶基因上低氧反应元件（ｈｙｐｏｘｉｃ ｒｅ— ｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ，ＨＲＥ）相结合使得这些靶基因发挥 各种各样的功能ｌ３ 。在肺癌组织中，肿瘤生长过快 所导致的局部缺氧、抑癌基因突变或者某些炎性因 子都可能导致癌组织中ＨＩＦ一１ａ表达增多 。］。但 是，对于ＨＩＦ ｌａ在肺癌的淋巴道转移过程中的作 用及其具体机制目前并不十分清楚。血管内皮生长 ・ ３３２ ・ 华中科技大学学报（医学版） 因子一Ｃ（ＶＥＧＦ—Ｃ）是ＶＥＧＦ家族成员之一，是一种 淋巴管内皮生长因子。它主要与表达在淋巴管内皮 上的ＶＥＧＦ－Ｒ３受体相结合，促进内皮细胞有丝分 裂，从而促进淋巴管生成 。有研究表明，在食管 癌及乳腺癌等恶性肿瘤细胞中ＨＩＦ一１ａ与ＶＥＧＦ—Ｃ 表达增高，且两者具有相关性［１ ］。转化生长因子一 ａ（ＴＧＦ＿ａ）是ＨＩＦ一１ａ的一个下游基因，其主要作用 是促进细胞增殖［１ 。本实验通过免疫组织化学的 方法检测ＨＩＦ一１ａ、ＶＥＧＦ—Ｃ及ＴＧＦ－ａ在肺癌组织 和正常肺组织中的表达，并分析其表达与微淋巴管 密度（１ｙｍｐｈａｔｉｃ ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ，ＬＭＶＤ）及 ＬＭＶＤ与肺癌临床病理特征之间的关系，以探讨 ＨＩＦ一１ａ、ＴＧＦ—ａ和ＶＥＧＦ－Ｃ在肺癌淋巴道转移过 程中的作用。 １材料与方法 １．１临床资料 收集７２例肺癌组织、癌周组织（距离肿瘤边缘 １～２ ｃｍ内组织）及２Ｏ例正常肺组织（距离肿瘤组 织边缘５ ｃｍ以上的组织）的标本。标本均来自武汉 市同济医院胸外科２００６～２００８年手术切除并经病 理科证实的组织蜡块。所有患者术前均未行放疗及 化疗，排除慢性呼吸及循环系统疾病，并具有完整的 临床病理资料。其中男性５３例，女性１９例；年龄 ３２～７５岁，平均５６．１岁。病理确诊鳞癌２９例，腺 癌３５例（包括２例腺鳞癌，主要构成成分为腺癌）， 大细胞癌３例，小细胞癌５例；高、中分化４４例，低 分化２８例。按国际抗癌联盟（ＵＩＣＣ）２００２年修订 的Ｐ—ＴＮＭ分期：Ｉ期２４例，Ⅱ期９例，Ⅲ期３３例， Ⅳ期６例。其中有淋巴结转移的４１例，无淋巴结转 移３１例。 １．２主要试剂 小鼠抗人ＨＩＦ—ｌａ多克隆抗体购自北京博奥森 生物有限公司。兔抗人ＶＥＧＦ—Ｃ多克隆抗体、小鼠 抗人Ｄ２—４０多克隆抗体、兔抗人ＴＧＦ—ａ多克隆抗 体、链霉卵白素一生物素一过氧化物酶溶液（ＳＡＢＣ）通 用型试剂盒及二氨基联苯胺（ＤＡＢ）显色试剂盒均 购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 １．３实验方法 采用ＳＡＢＣ免疫组织化学染色法。简要步骤 如下：将组织蜡块切成４ ｍ厚的切片，脱蜡至水， ＰＢＳ漂洗。加３％Ｈ Ｏ 消除内源性过氧化物酶并 室温孵育３０ ｍｉｎ，ＰＢＳ漂洗。采用微波修复法进行 抗原修复２Ｏ ｍｉｎ，ＰＢＳ漂洗后，滴加正常山羊血清 封闭３０ ｍｉｎ。分别加ＨＩＦ—ｌａ、ＴＧＦ—ａ、ＶＥＧＦ—Ｃ或 ２０１０年６月第３９卷第３期 Ｄ２—４０一抗（均用ＰＢＳ按１：１５０稀释）于４。Ｃ孵育 过夜。第２天取出置于３７。Ｃ温箱复温４５ ｍｉｎ，后依 次滴加生物素标记的二抗及链霉卵白素一生物素一过 氧化物酶溶液，ＤＡＢ显色，自来水漂洗，苏木精复染 细胞核，中性树胶封片。用ＰＢＳ代替一抗作阴性对 照。 １．４结果判定 ＨＩＦ一１ ｏ：主要表达在胞核和（或）胞质，ＴＧＦ— 和ＶＥＧＦ—Ｃ主要表达在胞质。每例标本在４００倍 显微镜下随机选定１０个视野，每个视野通过彩色 ＣＣＤ摄像机将图像输入计算机病理图像分析系统 （ＭＰＩＡＳ一２０００），转化为１０张数字图像。测量每张 图片中的阳性细胞的平均吸光度（Ａ）值。取１０张 图像测量结果的平均值，对此例标本的蛋白表达进 行定量。 用Ｄ２—４０标记淋巴管，结果测量参照Ｗｅｉ— ｄｎｅｒｌ１胡的标准：先在光镜低倍（×４０）视野下寻找组 织微淋巴管最密集区即热点，然后在２００倍视野下 观察着色的管腔及细胞丛，并以此计为１个微淋巴 管。每张切片计数５个视野（×２００）内的淋巴管数， 取其平均值为微淋巴管密度（ＬＭＶＤ）。 １．５统计学分析 应用ＳＰＳＳ １２．０统计软件包。所有数据采用均 数±标准差的形式表示。组间比较采用ｔ检验，相 关性采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关性分析。以Ｐ％０．０５判定差 异具有统计学意义。 ２ 结果 ２．１癌周组织ＬＭＶＤ及其与临床病理特征之间的关系 Ｄ２—４０免疫组织化学染色显示，微淋巴管主要 集中在癌周组织，表达丰富，形成多个热点。肿瘤组 织与癌周组织相比可观察到的淋巴管较少，偶见少 量被挤压变形的淋巴管；在正常肺组织中可观察到 少量淋巴管（图１）。按不同性别和年龄、吸烟与否 及肿瘤不同分化程度进行分组比较，发现各组间癌 周组织的ＬＭＶＤ差异无统计学意义（均Ｐ＞０．０５）； 而在不同病理类型及ＴＮＭ分期之间癌周组织的 ＬＭＶＤ差异有统计学意义（均Ｐ＜Ｏ．０１）；此外发生 淋巴结转移组癌周组织ＬＭＶＤ（１８．３７±３．４１）较未 发生转移组ＬＭＶＤ（１１．９５±４．７３）明显增高，２组间 差异有统计学意义（Ｐ＜０．Ｏ１）。见表１。 ２．２ ＨＩＦ－ｌａ、ＴＧＦ－ｕ和ＶＥＧＦ－Ｃ在肺组织中的表达 ＨＩＦ一１ａ主要表达在肺癌细胞胞核和（或）胞质， 在正常肺组织肺泡上皮可观察到少量阳性表达（图 ２）。ＴＧＦ—ａ主要表达在肺癌细胞胞质，正常肺组织 周思静等．缺氧诱导因子一１ａ在肺癌组织中的表达及其与肺癌淋巴道转移关系的研究 ・ ３３３ ・ 图１癌周组织（Ａ）、肺癌组织（Ｂ）及正常肺组织（Ｃ）中淋巴管分布（ＤＡＢ显色，×２００） Ｆｉｇ・１ Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｖｅｓｓｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ａ），ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｂ）ａｎｄ ｎｏｒｍａ】ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｃ）（ＤＡＢ×２００） ， 表１癌周组织ＬＭＶＤ与临床病理特征之间的关系 Ｔａｂｌｅ １ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＬＭＶＤ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈ０ｌｏｇｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ 图２ ＨＩＦ－Ｉ￣在不同肺组织中的表达（ＤＡＢ显色，×４００） Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＩＦ ｌａ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ａ） ａｎｄ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｂ）（ＤＡＢ，×４００） 图３ ＶＥＧＦ－Ｃ在不同肺组织中的表达（ＤＡＢ显色，×４００） Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ—Ｃ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ａ） ａｎｄ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｂ）（ＤＡＢ．×４００） 图４ ＴＧＦ—ａ在不同肺组织中的表达（ＤＡＢ显色，×４００） Ｆｉｇ・４ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ ａ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ａ）ａｎｄ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｂ）（ＤＡＢ。×４００） 表２不同肺组织中ＨＩＦ～１ａ、ＴＧＦ－ａ和ＶＥＧＦ～Ｃ的表达（Ａ，＿＿士ｓ） Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＩＦ １Ｑ，ＴＧＦ“ａｎｄ ＶＥＧＦ Ｃ ｉｎ 肺泡上皮有少量表达（图３）。ＶＥＧＦ—Ｃ主要表达在 ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ（Ａ， ±ｓ） 肺癌细胞胞质，正常肺组织肺泡上皮内偶见表达（图 ４）。ＨＩＦ～１ ｏｃ、ＴＧＦ— 和ＶＥＧＦ—Ｃ在肺癌组织中的 表达水平均高于正常肺组织，差异均具有统计学意 义（均尸＜Ｏ．０５，表２）。 Ｐ＜Ｏ．０５ ＶＳ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ・３３４・ 华中科技大学学报（医学版） ２．３ ＨＩＦ－Ｉａ与ＴＧＦ－ａ、ＶＥＧＦ－Ｃ表达水平及癌周组织ＬＭ－ ＶＤ的关系 ＨＩＦ一１ａ的表达水平与ＶＥＧＦ—Ｃ、ＴＧＦ—ａ表达 水平及癌周组织ＬＭＶＤ呈正相关（ｒ分别为０．４５２、 ０．３９６及０．４４４，均Ｐ％０．０５）；ＶＥＧＦ～Ｃ的表达水平 与ＴＧＦ— 表达水平及癌周组织ＬＭＶＤ呈正相关（ｒ 分别为０．３５７及０．５２３，均Ｐ％０．０５）。 ３讨论 经淋巴道转移是肺癌最重要的转移途径之一， 但其具体机制不明。ＬＭＶＤ的高低与肿瘤的淋巴 结转移情况相关，影响着肿瘤的分期。在癌周组织 的淋巴管可能参与肿瘤的淋巴道转移过程＿１ 。本 实验用淋巴管内皮的新型特异性标记物Ｄ２～４０来标 记肺组织中的淋巴管内皮细胞，结果显示微淋巴管 主要在癌周组织被观察到，肿瘤组织中少见微淋巴 管，可观察到的少量淋巴管被肿瘤组织挤压明显，而 成为无功能的淋巴管。发生淋巴结转移的病例组其 癌周组织中ＬＭＶＤ明显高于未发生转移组。 许多研究表明在肺癌组织中ＨＩＦ—Ｉｓ高表 达 ］。但ＨＩＦ一１ａ在肺癌淋巴道转移中的具体作用 并不清楚。我们的实验结果表明，肺癌组织中的 ＨＩＦ－ｌａ高表达，并且与癌周组织的ＬＭＶＤ呈正相 关。这说明ＨＩＦ—ｌａ可能在肺癌的淋巴道转移中发 挥了重要作用。 ＨＩＦ—ｌａ下游有１００多个靶基因，ＨＩＦ—ｌａ与靶 基因上ＨＲＥ相结合使靶基因发挥各种各样的功 能［３］。有研究显示，ＨＩＦ—ｌａ可以通过上调其下游基 因如血管内皮生长因子一Ａ（ＶＥＧＦ—Ａ）来促进恶性肿 瘤的血道转移ｌ＿】 。ＶＥＧＦ—Ｃ与ＶＥＧＦ—Ａ亚型１６５ 只有３Ｏ 序列同源，而且它主要与淋巴管内皮上的 ＶＥＧＦ—Ｒ３受体相结合，促进内皮细胞有丝，从 而促进淋巴管生成＿８ ］。实验结果显示，ＶＥＧＦ—Ｃ表 达水平与癌周组织ＬＭＶＤ呈明显正相关，癌细胞内 ＶＥＧＦ—Ｃ的表达通过促进癌周新生淋巴管生成而参 与到肿瘤淋巴道转移过程中。本实验发现，肺癌组 织中ＨＩＦ—ｌａ与ＶＥＧＦ－Ｃ的表达水平远高于正常肺 组织，并且两者之间具有明显的相关性。这与之前 在乳腺癌、食管癌及口腔鳞癌中的研究结果是一致 的Ｉ１。‘ 。这表明，ＨＩＦ—ｌａ可能通过上调其下游的 ＶＥＧＦ—Ｃ的表达，促进淋巴管生成，参与肿瘤转移。 ＴＧＦ—ａ是ＨＩＦ—ｌａ的另一个下游基因。在肿瘤 组织中，ＴＧＦ—ａ可以促进细胞的活动性、侵袭力并 能促进细胞增殖Ｌ１ 。ＴＧＦ—ａ与其受体ＥＧＦＲ相结 合后可激活ＧＴＰ结合蛋白ｒａｓ，从而抑制肿瘤组织 ２０１０年６月第３９卷第３期 的凋亡＿】 。本实验同样观察到，在肺癌组织中 ＴＧＦ—ａ表达水平显著高于正常肺组织，并且与 ＨＩＦ一１ 之间呈正相关。有研究发现在头颈部鳞癌 细胞中ＴＧＦ—ａ还可以上调ＶＥＧＦ－Ｃ信使ＲＮＡ的 表达＿２ 。在本实验中，ＴＧＦ—ａ与ＶＥＧＦ—Ｃ之间也 存在正相关性，在肺癌组织中ＴＧＦ—ａ可能也上调 ＶＥＧＦ—Ｃ的表达。提示ＨＩＦ－Ｉ￣可能是通过上调 ＴＧＦ—ａ水平来增加ＶＥＧＦ—Ｃ的表达，从而参与肺癌 癌周组织中的淋巴管生成。 综上所述，ＨＩＦ一１ａ在肺癌的发生发展过程中起 着重要的作用，它不仅参与肺癌的血道转移过程，还 可能通过直接上调ＴＧＦ—ａ和ＶＥＧＦ—Ｃ的表达参与 到淋巴道转移过程中，促进肺癌淋巴转移。但是，该 结论有待于细胞水平实验和体内实验的进一步证 实。 参 考 文 献 ［１］ 沈洪兵，俞顺章．我国肺癌流行现状及其预防对策［Ｊ］．中国 肿瘤，２００４，１３（５）：２８３ ２８５． ［２］ Ｍａｎａｌｏ Ｄ Ｊ，Ｒｏｗａｎ Ａ，Ｌａｖｏｉｅ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｅｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｈｙｐｏｘｉａ ｂｖ ＨＩＦ １［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００５，１０５（２）：６５９—６６９． Ｌ３］ Ｓｅｍｅｎｚａ Ｇ Ｌ，Ｎｅｊｆｅｌｔ Ｍ Ｋ，Ｃｈｉ Ｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒｓ ｂｉｎｄ ｔ０ ａｎ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ】ｏｃａｔｅｄ ３’ｔ０ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｅａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， １ ９９１，８８（１３）：５６８０—５６８４． Ｅ４］ Ｖｏｌｍ Ｍ，Ｋｏｏｍａｇｉ Ｒ．Ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｎ（ＨＩＦ一１ｑ）ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ １ｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０００，２０（３Ａ）：１５２７—１５３３． ［５］ Ｓｒｉｎｉｖａｓ Ｖ，Ｚｈａｎｇ Ｉ Ｐ，Ｃａｒｏ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｏｘ— ｙｇｅｎ／ｒｅｄｏｘ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ——ｉｎｄｕｅ—— ｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ ａｌｐｈａ（ＨＩＦ—ａｌｐｈａ）ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，ｌ９９９，２６０（２）：５５７－５６１． ［６］ Ｍａｓｓｏｎ Ｎ，ｗ｜ｌｌａｍ Ｃ，Ｍａｘｗｅｌｌ Ｐ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｆｕｎｃ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ—ａｌ— ｐｈａ ｃｈａｉｎｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｐｒｏｌｙｌ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ， ２００１，２Ｏ（１８）：５１９７－５２０６． ［７］ Ｊｕｎｇ Ｙ Ｊ，Ｉｓａａｃｓ Ｊ Ｓ，Ｌｅｅ Ｓ，ｅｔ ａ１．ＩＬ一１ｂｅｔａ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｕｐ ｒｅｇｕ— ｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＩＦ一１ ａｌｐｈａ ｖｉａ ａｎ ＮＦｋａｐｐａＢ／ＣＯＸ一２ ｐａｔｈｗａｙ ｉｄｅｎ— ｔｉｌｔｅｓ ＨＩＦ一１ ａｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｎｃｏ— ｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＦＡＳＥＢ Ｊ，２００３，１７（１４）：２ｌ１５—２ｌ１７． ［８］ Ｏｈ Ｓ Ｊ，Ｊｅｌｔｓｃｈ Ｍ Ｍ，Ｂｉｒｋｅｎｈａｇｅｒ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＶＥＧＦ ａｎｄ ＶＥＧＦ— Ｃ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ １ｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ａｖｉａｎ ｃｈ０ｒｉ０ａ１１ａｎｔｏｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌ— ｏｐｍｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ。１９９７．１８８（１）１ ９６—１０９． ［９］ Ｋａｒｐａｎｅｎ Ｔ，Ｅｇｅｂｌａｄ Ｍ，Ｋａｒｋｋａｉｎｅｎ Ｍ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎ— ｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｃ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｔｒａｌｙｍｐｈａｔｉｅ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ１．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００１，６１ （５）：１７８６—１７９０． ［１０］Ｋａｔｓｕｔａ Ｍ．Ｍｉｙａｓｈｉｔａ Ｍ，Ｍａｋｉｎｏ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙ— ｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ一１ ａｌｐｈａ ｗｉｔｈ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｖｉａ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—Ｃ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａ１ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｍｏｌ ＰａｔｈｏＩ，２００５，７８（２）：１２３—１３０． ｒ¨］ Ｎｉｌｓｓｏｎ Ｉ，Ｓｈｉｂｕｙａ Ｍ，Ｗｅｎｎｓｔｒｏｍ Ｓ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２００４，２９９（２）：４７６－４８５． ［１２］Ｓｃｈｏｐｐｍａｎｎ Ｓ Ｆ，Ｆｅｎｚｌ Ａ，Ｓｃｈｉｎｄｌ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ一１“ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ＶＥＧＦ－Ｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｙｍ— ｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ， ２００６，９９（２）：１３５ ｌ４１． ［１３］Ｋｒｉｓｈｎａｍａｅｈａｒｙ Ｂ，Ｂｅｒｇ—Ｄｉｘｏｎ Ｓ，Ｋｅｌｌｙ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ 周思静等．缺氧诱导因子一１ａ在肺癌组织中的表达及其与肺癌淋巴道转移关系的研究 ・ ３３５ ・ （上接第３３０页） 参 考 文 献 ［１］ Ｉｎｕｚｕｋａ Ｔ，Ｔｓｕｄａ Ｍ，Ｔａｎａｋａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｇｒａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｒａｎ— ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ８ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ａｎｇｉｏ— 实体瘤细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用［Ｊ］．中华实验 外科杂志，２００５，６（２２）：６９２—６９４． ［８］ 朱欠元，李宝金，郭剑．腺病毒介导ＫＤＲ启动子的胸苷激酶 基因治疗小鼠人鼻咽癌模型［Ｊ］．第四军医大学学报，２００６， ２７（１０）：９２７ ９２９ ｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００９，６９（４）：１６７８一ｌ６８４． ［２］ Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ Ｅ，Ｄｅｂｉｔｏｎ Ｅ，Ｆａｂｂｒｏ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａ ｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｔｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｍｅｒｉｄｉａｎｉｎ ｄｅ— ［９］ Ｉ ｉ Ｈ Ｊ，Ｅｖｅｒｔｓ Ｍ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｔｒａｎｓｄｕｃ— ｔｉｏｎａｌ ｕｎｔａｒｇｅｔｉｎｇ／ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉ０ｎａｌ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｈｅｐａｔｉｃ ｒｉｖａｔｉｖｅｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，２００８，ｌ９（８）：７８９—７９２． Ｅ３］ Ｆｅｒｒｅｉｒａ Ｔ Ｂ，Ｐｅｒｄｉｇａｏ Ｒ，Ｓｉｌｖａ Ａ Ｃ，ｅｔ ａ１．２９３ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｓｙｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｔｕｍｏｒｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００９，６９（２）：５５４— ５６４． ｃｈｒｏｎｉｓａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｐｒｏｇ，２００９，２５（１）：２３５－２４３． ［１０］ Ｌｖ Ｓ Ｑ，Ｚｈａｎｇ Ｋ Ｂ，Ｚｈａｎｇ Ｅ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ／５－ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ ｓｕｉｃｉｄｅ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ［４］ ＭＯｂｉｕｓ Ｃ，Ｄｅｍｕｔｈ Ｃ，Ａｉｇｎｅｒ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ Ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｌｃｒｏｖａｓｅｕｌａｒ ｄｅｎｓｉｔｙ ａｓ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｔａｅｔｏｒｓ ｉｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｇｌｉｏｍａｓ：ａｎ ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｍｅｄ Ｓｃｉ Ｍｏｎｉｔ，２００９，１５（１）：１３—２Ｏ． ｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｅｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ，２００７， ３３（８）：１Ｏ２５—１Ｏ２９． ［１１］ Ｎｅｖｅｓ Ｓ，Ｆａｎｅｃａ Ｈ，Ｂｅｒｔｉｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ ｉｉｐｏｐｌｅｘ ｍｅｄｉ— ａｔｅｄ ｓｕｉｃｉｄｅ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｅｏｍｐｅｔｅｎｔ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ［５］ Ｈｅｎｇ Ｄ Ｙ，Ｂｕｋｏｗｓｋｉ Ｒ Ｍ．Ａｎｔｉ—ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｄｖａｎｃｅｄ ｒｅｎａ１ ｅｅｌ１ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｎ］．Ｃｕｒｒ Ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２００９，１６ （１）：９１～ｌ０１． ［６］ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，２００８，８（８）：６７６ ６８２． Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｈ，Ｔａｍａｋｉ Ｙ，Ｉｓｈｉｉ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏ— ｖｅｌ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｎｄ ［１２］ Ｍａｒｓｃｈａｌｌ Ｚ Ｖ，Ｃｒａｍｅｒ Ｔ，ＨＯｃｋｅｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｅ ｎｏｖｏ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａＩ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｆｏｒ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ ｒＪ］．ｃｕｒｒ Ｅｖｅ Ｒｅｓ，２００８，３３（１１）：１００２ １０１０． ｃａｎｃｅｒ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａｎ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ ｌｏｏｐ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏ ｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０００，ｌ１９（５）：１３５８—１３７２． ［７３ 苏国强，黄宗海，苏刚，等．ＫＤＲ启动子驱动的双自杀基因对 （２００９－０９—０１ 收稿）
