中国医药指南２０１０年６月第８卷第１８期Ｇｕｉｄｅ ｏｆＣｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｕｎｅ ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．１８ 论 著Ｉ ７ 素，对冠心病的诊断是十分必要的。ＣＡＧ具有诊断特异性强，准确性 高的优点，应予推广 】。当然，对于疑为冠心病而ＣＡＧ阴性者，还应 ［２］黄从新．非冠状动脉性的ｓ丁－Ｔ改变［Ｊ］心电学杂志，２００１，２Ｏ（２）： １２Ｏ．１２５． 考虑到冠状动脉痉挛及微小病变等，不能轻易否认冠心病诊断。对心 电图异常，应仔细辨别，必要时反复检查，包括动态心电图和运动心 电图等，就临床经验和我们的研究来说，典型的ＳＴ段改变再加上典 型的临床症状对冠心病的诊断仍具有很高的准确性。对该类患者的处 理，众说不一，依笔者的经验，可给予地奥心血康、银杏叶制剂、丹 ［３】Ｓｕｅｄａ Ｓ，Ｋｏｈｎｏ Ｈ，Ｆｕｋｕｄａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｕｒｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｓｐａｓｔｉｃ ａｎｇｉｎａ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，２００３，１２３（２）： ３８０—３８６． ［４］黄德嘉，章茂顺，李惠，等．１０６例心律失常伴不典型胸痛患者冠脉 造影结果分析［Ｊ］ｌ中华心血管病杂志，１９９４，２２（１）：３２． ［５】Ｃａｎｎｏｎ ＲＯ ａ１．Ｌｉｍｉｔａｔｅｄ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｆｌｏｗ ｒｅｓｅｒｖｅ ａｆｔｅｒ ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ 参片等作用广泛又平和的药物，长期或间歇服用；个别症状明显，运 动心电图阳性，发作频繁者，可加用酯类等。 ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｒｇｏｎｏｖｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｏｒｏｎａｙ ｒｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９８７，７５（１）：１６３． 参考文献 ［１］李占全．冠状动脉造影与临床［Ｍ】．沈阳：辽宁科学技术出版社， ２００２：９０—１ ２４ （６】杨晓帆，宫剑滨，江时森，等．临床拟诊冠心病冠状动脉造影阴性 １８０例分析［Ｊ］ｌ中国综合临床，２００５，２ｌ（２）：１０３—１０４． 肝癌患者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ＿＿．￣胞的检测意义及冷冻消融对其表达的影响 杜志强 姜良进 秦健勇 【摘要】目的探讨肝癌惠者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞的变化意义及冷冻消融治疗对其表达的影响。方法采用流式细胞技术分别检测ｌ８例 原发性肝癌惠者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＊Ｔ细胞的变化，并与健康对照组比较。同时检测１０例原发性肝癌惠者冷冻消融术前和术后３个月外周血 ＣＤ４＋ＣＤｊＴ细胞水平的变化。结果肝癌患者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞占总ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞百分比高于健康对照组［（１５．１±１．６）％ｖｓ（７－３± １．２）％，ｔ－＝１５．５６，Ｐ＝０．０００］。其升高与惠者血清ＡＦＰ浓度（ｔ－＝２．１６，Ｐ＜０．０５）、肿块大小（ｔ＝２．７３，Ｐ＜Ｏ．０５）和ｌ临床分期（ｔ＝３．Ｏ０，Ｐ＜０．０１） 显著相关，而与患者性别（ｆ＝０．２３，Ｐ＞０．ｏ５）、年龄（ｔ－＝Ｉ．６１，Ｐ＞Ｏ．０５）和结节数量（ｆ＝１．Ｏ０，Ｐ＞Ｏ．０５）无显著相关。冷冻消融治疗能使 ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞显著性降低［（１４．５±１．６）％ｖｓ（Ｉ１．３±１．４）％，ｔ－４．３７，Ｐ＜０．Ｏ１】。结论原发性肝癌患者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞水平较高， 检测外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞表达可作为肝癌患者荷瘤状况和疗效评估的方法之一。 【关键词】原发性肝癌；ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞；检测 中图分类号：Ｒ７３５．７ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１９４（２０１０）１８－０００７－０２ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ＣＤ４ ＣＤ２５＋Ｔ ＣｅＨｓ ｉｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃｒｙｏａｂｌａｔｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｉｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ＤＵＺｈｉ—ｑｉａｎｇ，ＪＩＡＮＧＬｉａｎｇ－ｊｉｎ，ＱＩＮＧＪｉａｎ－ｙｏｎｇ ｆＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，Ｌｉｗａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０１ ７０，Ｃｈｉｎｎ） ＩＡｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｏｆ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｉｒｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｒｙｏａｂｌａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅｉｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄ Ｔｈｅ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ＣＤ￣＋ＣＤ２５＋Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｈａｎｇｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，ｂｅｔｗｅｅｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ３ ｍｏｎｔｈ ａｆｔｅｒ ｃｒｙｏａｂｌａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ（１５．１￣１．６）％ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆＣＤ４＋Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｎｄ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ［（１５．１士１．６）％ｖｓ（７．３￣１＿２）％，ｔ－１５．＝５６， ，Ｐ＝０．０００］．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ ｃｅｌｌｓｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎ ｐｅｉｒｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｗｉｔｈｐａｔｉｅｎｔｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍＡＦＰ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｔ－＝２．１６．Ｐ＜０．０５）．ｔｕｍｏｒ ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ（ｆ＝２．７３，Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓａｔｇｅｓ（ｆ：３．Ｏ０，Ｐ＜０．０１），ｗｈｉｌｅｉｔｈａｓｌｉｔｔｌｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈ ｓｅｘ（ｔ＝０，２３，Ｐ＞０．０５），ａｇｅ（ｔ＝１．６１，Ｐ＞０．０５）ａｎｄｔｕｍｏｒ ｎｏｄｕｌｅ ｎｕｍｂｅｒｓ（ｔ＝１．Ｏ０，Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＣＤ［ＣＤ２５＋Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｉｒｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｗｉｔｈ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｅａｓｅｄ ３ｍｏｎｔｈ ａｆｔｅｒ ｃｒｙｏａｂｌａｔｉｏｎｔｈａｎｔｈａｔ ｂｅｆｏｒｅ ｃｒｙｏａｂｌａｔｉｏｎ［（１４．５￣１．６）％ｖｓ．（１１．３￣１ｌ４）％，ｔ＝４．３７，Ｐ＜０．０１］．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｌｅｖｅｌ ｏｆＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｒｏｍ ｆｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｓ ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｆｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，ｍｅａｓｕｒｅ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｗｏｕｌｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｊｕｄｇｉｎｇ ｔｈｅ ｕｔｍｏｒ ｌｏａｄ ａｎｄ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ． ＩＫｅｙ ｗｏｒｄｓＪ Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ＣＤ４ Ｃ ｓ＋Ｔ ｃｅｌｌ；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ 肿瘤的发生、发展与机体的免疫监视机能密切相关。我门探讨 肝癌患者外周血ＣＤ ＣＤ 调节性Ｔ细胞水平与肝癌的关系及其临床意 义，以及氩氦刀靶向局部消融治疗对其表达水平的影响。 １材料与方法 １．１临床资料 ５８岁。其中小肝癌（≤５ｃｍ）７例，大肝癌（＞５ｃｍ）ｌｌ例，肝内肿瘤 结节１个８例，≥２个ｌ０例，手术前ＡＦＰ＞５００１１ｇ／Ｌ １３例，＜５００ｇｇ／Ｌ ５ 例。按我国１９９７年分期标准分为Ｉ／Ⅱ期１２例，Ⅲ期６例。所有病例经 病理学或影像学确诊，ＫＰＳ评分≥７Ｏ分。排除合并免疫系统或者感染 广州医学院荔湾医院肿瘤科（５１ ０１ ７０） 原发性肝癌患者ｌ８例，男１０例，女８例，年龄４５～７２岁，中位年龄 ８ Ｉ论 著 中国医药指南２０１０年６月弟８卷第１８期Ｇｕｉｄｅ ｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｕｎｅ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．１８ 表１ 肝癌患者外周．￣ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞数量与肿瘤临床病理的关系（％，更±Ｓ） 性疾病，６０ｄ内未接受化疗或者影响免疫功能药物。其中ｌ０例患者行 经皮穿刺氩氦刀靶向局部消融治疗。正常对照组：健康献血者１５例， 其中男９例，女６例，年龄４２－７０岁，中位年龄５５岁。 ＩＬ．２分泌等Ｔ细胞活化现象，后者表现为能抑制ＣＤ４＋、ＣＤｓ＋Ｔ细胞、Ｂ 细胞及ＮＫ细胞的活化并可产生抑制性细胞因子￣ｎＴＧＦ—ｐ和ＩＬ—ｌＯ，负 性调节效应Ｔ细胞口］。许多肿瘤抗原为自身抗原，ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞能抑 制Ｔ细胞对外来和自身抗原的免疫应答，因而在维持对自身成分耐受 的同时也导致肿瘤细胞的免疫逃避。 我门研究发现，肝癌患者外周血ｑｈＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞占总ｃＤ Ｔ细 胞的百分比比健康对照组高。引起这种变化的可能原因是肿瘤抗原 １．２试剂和仪器 ＰＥ标记的鼠抗人ＣＤ ，ＦＩＦＣ标记的鼠抗人ＣＤ 单克隆抗体及同 型对照ＰＥ标记的鼠抗人ＩｇＧ。，ＦＩＴＣ标记的鼠抗人ＩｇＧ１免疫球蛋白 购自法国Ａ．ＣＯＵＬＴＥＲ公司。氩氦冷冻系统（ＣｒｙｏｃａｒｅＴＭ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍ）为美国Ｅｎｄｏｃａｒｅ公司产品，ＦＡＣＳＡｒｉａＴＭ流式细胞仪为美国 ＢＤ公司产品。 １．３方法 衍化因子诱导体Ｐ￣ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞的分化或者对肿瘤抗原持续刺激 而引起的生理性防御反应 】。本结果同时显示，肝癌患者外周血中 ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞数量增高与患者性别、年龄、肿块的数量无明显相 分别采集肝癌患者、健康献血者、肝癌患者冷冻消融治疗前及治 疗后３个月外周静脉血２ｍＬ，肝素抗凝。ＦＡＣＳＡｒｉａＴＭ流式细胞仪检测 ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞￣ＣＤ４＋Ｔ细胞总数的百分比。 １．４统计学方法 关，而与血清ＡＦＰ浓度、肿块大小和临床分期密切相关。提示随着肿 瘤细胞增生，肿瘤负荷增多，其诱导体￣ＪＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞分化数 量增多，使免疫细胞的活性被抑制。同时，由于机体免疫功能抑制 的加深更加有利于肿瘤的生长和转移而致疾病进展。我们还发现， 所有计量资料以均数±标准差表示，使用ＳＰＳＳＩ１．Ｏ统计软件进行 方差分析及两两比较，组内前后比较用配对ｔ检验，Ｐ＜０．０５为有统计 学意义。 冷冻消融在减轻肿瘤负荷的同时也使患者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞占总 ＣＤ４＋Ｔ细胞的百分比降低。估计可能原因是冷冻消融一方面降低肿瘤 负荷，使肿瘤抗原衍化因子诱导ＣＤ ｃＤ： Ｔ细胞分化减少，另一方面 肿瘤消融后释放或暴露出许多新的抗原，刺激机体ＮＫ细胞和ＣＤ １细 ２结果 ２．１不同组￣ＣＤ４＋ＣＤ２ｓ＋Ｔ细胞Ｉ￣ＣＤ４＋Ｔ细胞总数的百分比的比较 １８例肝癌患者与１ ５例健康对照者外周血ｒ：￣ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞占总 ＣＤ４＋Ｔ细胞的百分比分别为（１５．１±１．６）％和（７．３±１．２）％，其差肝癌 患者外周血中ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞的数量显著高与对照组（ｔ＝ｌ ５．５６， 胞升高，以及细胞因子ＩＮＦ—ｖ、ＴＮＦ－Ｄ升高等Ｔｈｌ样反应偏移等免疫 反应 】，使ＣＤ４＋ＣＤ２ｓ＋Ｔ／ＣＤ４＋Ｔ细胞比例降低。当然，有关肿瘤细胞如 何使ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞升高，ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞与肿瘤的发展和预后的具 体关系待于今后进一步研究。 Ｐ＝－０．０００）。 我们认为，肝癌患者体ｐ￣ＣＤ４＋ＣＤ２ｓ＋Ｔ细胞增高，并且与肿瘤的负 荷、分期和病程相关。检测肝癌患者外周血＠ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞可作为 患者荷瘤状况和疗效评估方法之一。清除ＣＤ４＋ＣＤ：ｓ＋Ｔ细胞或者下调其 活性可成为一种新的肿瘤免疫治疗方法。 ２．２肝癌患者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２ｓ＋Ｔ细胞数量与临床病理各参数的关系 肝癌患者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２ｓ＋Ｔ细胞数量与患者性别（ｆ＝Ｏ．２３，Ｐ＞ Ｏ．０５）、年龄（ｆ＝１．６１，Ｐ＞０．０５）和结节数量（卢１．Ｏ０，Ｐ＞０．０５）无显著相 关；而与患者血清ＡＦＰ浓度（ｔ－＝２．１６，Ｐ＜０．０５）、肿块大小（卢２．７３， Ｐ＜０．０５）和临床分期（ｔ－＝３．００，Ｐ＜０．０１）显著相关（表１）。 ２－３肝癌患者冷冻消融治疗前后外周血ＣＤ４＋ＣＤ２￣＋Ｔ细胞数量的比较 冷冻消融治疗术后３个月外周血０７ＣＤ４＋ＣＤｚ５＋Ｔ细胞占总ＣＤ Ｔ细胞 参考文献 ［１］Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＲＨ．Ｎａｔｕｒａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｓｅｌｆ－ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５，６（４）：３２７—３３０． ［２】Ｓｈｅｖａｃｈ ＥＭ．Ｃｅ￣ｉｉｆｅｄ ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ：ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｔ 数的百分比为（１１－３±１－４）％，与治疗前（１４．５±１．６）％比较，治疗后外周 血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞数量降低，差异有显著性（ｔ＝４．３７，Ｐ＜０．０１）。 ３讨论 ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２００１，１９３（１１）：４１－４６． ［３］陈中，宴建军，倪家连，等．肝细胞微环境中ＣＤ ＣＤ・２５＋调节性 Ｔ细胞的分布及其临床病理意义［Ｊ】＿中华肝胆外科杂志，２００７， １３（１０）：６７８—６８１． ［４］Ｏｓａｄａ Ｓ，Ｉｍａｉ Ｈ，Ｔｏｍｉｔａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｒｕｍ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｒｙｏａｂｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ，２００７，９５（６）：４９１—４９８． 肿瘤的发生、发展与机体的免疫监视机能密切相关。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ 细胞是一个具有独特免疫调节功能的Ｔ淋巴细胞亚群，具有免疫 性和免疫抑制性等特点…。前者表现为受抗原刺激后既不增生亦无
