2021年正交试验法优选黄柏酒炙的炮制工艺研究

正交试验法优选黄柏酒炙的炮制工艺研究

马雪松邹兵 张凡 李峰 沈晓庆
摘要目标 优选酒炙黄柏的最好炮制工艺。方法以盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱的含量为评价指标，选择加酒量、炒温制度及炒制时间 优选黄柏酒制的最好炮制工艺。为考察原因，采取正交设计L9（34）
，结果黄柏酒制的最好炮制工艺为：每20g药材用黄酒（按每100kg黄柏药材使用20kg黄酒）闷润，在150～160℃下炒制6min。结论酒炙黄柏的最好炮制工艺合理可行。

关键词黄柏 酒炙 盐酸小檗碱 盐酸黄柏碱 正交试验
Abstract Objective：Tooptimize the best preparation technology o Phellodendron Schneid.Method: The content of berberine and phellodendrine was regarded asevaluated index. The amount of adding wine, time for processing andtemperature for processing were choosen as research factors. Theprocess was selected with the orthogonal design L9（34）Result:The optimal procedure was set as follows：addingamount of 15ml wine per 100g Phellodendron Schneid. heating at150～160℃for 6 minutes. Conclusion:

PhellodendronSchneid. is reasonable．

Keywords Phellodendron Schneid Wine Fried Berberine

PhellodendrineOrthogonal experimental
黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendronchinense Schneid．的干燥树皮，药性苦、寒，入肾、膀胱经[1]。有效成份为生物碱类化合物，另含柠檬苦素和甾体等成份。在《本草纲目》中记载：“黄檗性寒而沉，生用则降实火，熟用则不伤胃，酒制则治上，盐制则治下，。其中酒制黄柏能够缓其苦寒之性，借酒力以上腾，能蜜制则治中”清上焦湿热，且能入血分，治血分之热。可用于诊疗肝胆实热引发的头疼，耳鸣，咽喉肿痛，大便秘结等症[2]。据文件报道其生物碱成份中的盐酸小檗碱[3]和盐酸黄柏碱含有抗炎和抗癌活性，而黄柏碱同时含有降血压的疗效，其本身也是合成降血压药的母核[4]，故用小檗碱和黄柏碱作为考评黄柏酒制工艺的指标是可行的。因酒制法炮制黄柏其炮制工艺、详细工艺参数，文件中未见报道。所以本试验以盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱为指标，考察酒制黄柏的炮制工艺及最好参数，为深入研究酒制黄柏作用提供科学依据。

1仪器和试药
1.1 仪器
安捷伦1100series液相色谱仪（G1314A紫外检测器）；METTLERAE240 型十万分之一分析天平(瑞士METTLER)，KQ250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限企业)，FA1004B电子天平(上海精密科学仪器有限企业)，烘箱（WS70B型）。

1.2药材
黄柏药材，购自四川省药材企业，经辽宁中医药大学要用植物教研

室王冰教授判定为芸香科植物黄皮树Phellodendronchinense Schneid．的干燥树皮。

1.3试剂和试药
乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

盐酸小檗碱对照品购自药品生物制品检定所（批号07139906）。 盐酸黄柏碱对照品购自成全部曼思特生物技术有限企业，供含量测定使用，纯度均大于98%。

黄酒（绍兴市古泉酿酒厂，批号20210926，酒精度9%）。

2方法和结果
2.1 盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱的含量测定
2.1.1 盐酸小檗碱的含量测定
对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品9.52mg,置100mL 摇匀,即得每1mL含盐酸小檗碱0.0952mg量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
的对照品溶液。

供试品溶液的制备：称取不一样条件下炮制品粉末约0.1g，精密称定，制50mL容量瓶中，加甲醇约40mL，超声处理（功率250W，频率40kHz）40min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，既得。

色谱条件：色谱柱TCC18（150mm×4.6mm，安捷伦）；流动相：乙腈0.1%磷酸溶液（体积比1：1）（每100mL加十二烷基硫酸钠0.1g），检测波长为265nm；流速：1mL/min；柱温为30℃。理论板数按盐酸小檗碱计算应不低于4000[1]。

2.1.2盐酸黄柏碱的含量测定
对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品0.415mg,置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀,即得每1mL含盐酸小檗碱0.00415mg的对照品溶液。

供试品溶液的制备：称取不一样条件下炮制品粉末精密称定0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入1%醋酸甲醇25mL，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放凉，再称定重量，用1%醋酸甲醇补足减失的重量，摇匀，摇匀，取续滤液，即得。

色谱条件：色谱柱TCC18（150mm×4.6mm，安捷伦）；流动相：乙腈0.1%磷酸溶液（40：60）（每100ml加十二烷基硫酸钠0.2g），检测波长为284nm；流速：1.0ml/min；柱温为30℃，进样量为5μl。理论板数按盐酸黄柏碱计算应不低于6000[1]。

2.2单原因试验考察
2.2.1 加酒量的考察
取黄柏饮片5份，每份20g，分别加入黄酒（每100kg药材分别用黄酒10kg、15kg、20kg、25kg）至密闭容器内，闷润4h后，在温度为150～160℃下炒制5分钟后出锅，放凉，备用。

表2加酒量考察结果
不一样的加酒量下，盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱的含量结果表明，
有所不一样，说明，加酒量是影响黄柏生物碱的关键原因。且从表2能够看出，在加酒量为每100kg药材用黄酒20kg是，生物碱的综合评分最高，所以每100kg药材用黄酒20kg进行下一组单原因考察。

上式X为盐酸小檗碱含量，Y为盐酸黄柏碱含量，并对黄柏酒制品的综合评分的两个指标的参数各设为50%，下同。

2.2.2闷润时间的考察
取黄柏5份，每份20g，加入黄酒（按每100kg药材用黄酒20kg）至密闭容器内，分别闷润1h、2h、4h、6h、8h后，在温度为150～160℃下，分别炒制5min后出锅，放凉，备用。

表3闷润时间考察结果
结果表明不用闷润时间下，只要闷润时间超出1h以上，生物碱的含量改变不大，说明闷润时间不是影响黄柏中生物碱的关键原因。所以在正交试验中不选择闷润时间为考察原因。

2.2.3炒制温度的考察
取黄柏5份，每份20g，加入黄酒（按每100kg药材用黄酒20kg）至密闭容器内，闷润4h后，分别在温度为120～130℃、130～140℃、140～150℃、150～160℃、160～170℃炒制5min后出锅，放凉，备用
表4炒制温度考察结果
结果表明不一样温度下，生物碱的含量有所不一样，说明炒制的温度是影响生物碱含量的原因。从表4能够看出在温度为150～160℃下炒制的酒黄柏，生物碱的综合评分最高，所以选炒制温度为150～160℃进行下一组单原因考察。

2.2.4炒制时间的考察
取黄柏5份，每份20g，加入黄酒（按每100kg药材用黄酒20kg）

至密闭容器内，闷润4h后，在温度为150～160℃下分别炒制3min、4min、5min、6min、7min后出锅，放凉，备用。

表5炒制时间考察结果
结果表明在不一样炒制时间下，生物碱的含量有所不用，说明炒制时间是影响生物碱含量的原因。从表5能够看出在炒制时间为5min时候的酒黄柏，生物碱的综合评分最高。

2.3正交试验
由上述单原因考察能够看出酒炙黄柏虚考虑的关键原因有加酒量、炒制温度、炒制时间3个原因，故以加酒量、炒制温度、炒制时间为考察原因，以盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱的含量为指标，依据单原因考察设计正交试验原因水平表，按L9（34）正交试验表进行试验，其原因水平表见表6，正交试验设计见表7，方差分析表见表8
表6原因水平表
表7正交试验设计表
表8含量方差分析表
注：F0.05(2,2)=19.00
由以上方差分析结果能够得出，酒制黄柏的影响原因为C(炒制时间)>B(炒制温度)>A(加酒量)，且B原因和C原因对黄柏酒炙生物碱 而A原因对黄柏酒炙的生物碱含量无显著影响。的含量有显著的影响，
结合直观分析表并考虑生产实际，确定其炮制的最好工艺为A2B2C3,即药材加入黄酒（每100kg药材用黄酒20kg）润透，锅底温度为150～160℃，炒制6min。

2.4验证试验
为深入考察最好炮制工艺的可靠性和稳定，按上述最好工艺进行2次验证试验。

取黄柏2份，每份20g，加入黄酒（每100kg药材用黄酒20kg）润透，在锅底温度为150～160℃时，分别炒制6min后出锅，放凉，备用。取上述2份炮制品，并按2.1 项下的试验步骤对其进行含量测定。

表9验证试验结果
由表9可知，样品1和样品2的盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱的含量均较高且稳定，和正交试验结果相吻合，说明本文最好炮制工艺可行。

3讨论和结论
3.1 本试验在单原因考察之前，进行了预试验，既将酒制黄柏、清 两种炮制品的黄柏比生黄柏炒黄柏和生黄柏的生物碱含量进行比较。

的生物碱有所降低，但将酒制黄柏和清炒黄柏比较，酒制黄柏的生物碱含量比清炒黄柏的含量要高，能够说明加入黄酒作为辅料炮制后的 能有利于药材中有效成份的溶出，黄柏，对生物碱起到了助溶的作用，
使得酒炒过的黄柏比清炒品种的生物碱含量高[5]。

3.2本试验在单原因考察中，分别以加酒量、炒制温度和炒制时间为影响黄柏酒制的工艺的关键原因，而闷润时间对黄柏的生物碱含量影响不大，只要超出2h小时即可。另外闷润时间也随季节而不一样，夏季室温高，酒挥散的较快且较多，而到了冬季则恰恰相反，造成影响闷润时间的原因很多。因此只要在每次润药时，只要药材将酒吸尽

润透即可。

3.3加酒量、炒制温度、炒制时间对酒制黄柏的生物碱含量全部有影响，且伴随加酒量的增加、温度的升高和时间的延长，酒制黄柏的生物碱含量均大致展现先升高后降低的趋势。

3.4本试验认为加酒量、炒制温度、炒制时间为影响黄柏炮制的关键原因，并以三种原因进行正交设计，以盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱为指标，对酒制黄柏的最好炮制工艺进行优选，筛选出最好工艺为药材加入黄酒
（每100kg药材用黄酒20kg）润透，锅底温度为150～160℃，炒制6min。本试验结果为深入探讨酒制黄柏的炮制作用，制订黄柏酒制品的质量标准提供了参考依据。

参考 文 献
[1]药典[S]．一部．2021:286.

[2]冉懋雄，郭建民等．当代中药炮制手册[M]．北京：中医药出版社，2021:297～298.

[3]廉莲，贾天柱．黄柏及其炮制品对小鼠及大鼠胃肠功效的影响[J]．中成药，2021，4：590～593.

[4]李峰，贾彦竹.黄柏的临床药理作用［J］.中医药临床杂志，2021，16（2）：191.

[5]贾天柱．中药炮制学[M]．上海科学技术出版社，2021:196.